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已经配制好的培养基怎么灭菌?

作者:日水生物来源:青岛日水生物技术有限公司官网 日期:2018-09-28 13:42
已经配制好的培养基怎么灭菌?如何判定配制的培养基灭菌是否彻底?
培养基干粉是有菌的,配置好后,如果不及时灭菌,细菌就会大量繁殖,消耗营养成分,导致培养基失去原有作用,所以必须及时灭菌。
如果怕高压不充分,灭菌不彻底,可一每次多配置一小份同样的培养基,高压后放置培养箱中,如果该小份培养基出现大量菌增殖现象,说明灭菌不充分;反之,则是无菌的。
灭菌指示剂分为化学指示剂和生物指示剂。灭菌时将指示剂放入灭菌锅中的不同部位一同灭菌,如果是化学指示剂则其颜色变化符合要求;生物指示剂(嗜热芽胞杆菌)灭菌后进行培养为阴性。
按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌:普通培养基为121摄氏度20分钟,以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。经灭菌后,如需要作斜面固体培养基,则灭菌后立即摆放成斜面,斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜;半固体培养基灭菌后,垂直冷凝成半固体深层琼脂。 
倒平板:将需倒平板的培养基,于水浴锅中冷却到45至50摄氏度,立刻倒平板。 
灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物,灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍物理方法的一种,即加热灭菌。 
加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内蛋白质凝固变性,从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关,含水量越高,其凝固所需要的温度越低。在同一温度下,湿热的杀菌效力比干热大,因为在湿热情况下,菌体吸收水分,使蛋白质易于凝固;同时湿热的穿透力强,可增加灭菌效力。 
高压蒸汽灭菌用途广,效率高,是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2小时,水蒸气的温度升高到121摄氏度,经15至30分钟,可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。
培养基灭菌注意事项:
加水:打开灭菌锅盖,向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水,以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够,防止灭菌过程中干锅。 
装料、加盖:灭菌材料放好后,关闭灭菌器盖,采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋,使蒸汽锅密闭,勿使漏气。 
排气:打开排气口,用电炉加热,待水煮沸后,水蒸气和空气一起从排气孔排出,当有大量蒸汽排出时,维持5分钟,使锅内冷空气完全排净。 
升压、保压和降压:当锅内冷空气排净时,即可关闭排气阀,压力开始上升。当压力上升至所需压力时,控制电压以维持恒温,并开始计算灭菌时间,待时间达到要求(一般培养基和器皿灭菌控制在121摄氏度,20分钟)后,停止加热,待压力降至接近“0”时,打开放气阀。注意不能过早过急地排气,否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。 
灭菌后的培养基空白培养:灭菌后放于37摄氏度培养箱中培养,经24小时培养无菌生长,可保存备用;斜面培养基取出后,立即摆成斜面后空白培养;半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后,空白培养。 
干热灭菌法:通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌的物品包装就绪后,放入电烘箱中烘烤,即加热至160至170摄氏度维持1至2销售。 
干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。凡带有胶皮的物品,液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。 
灭菌前的准备:玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞,以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下:平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内;三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸,用棉绳以活结扎紧,以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染;吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心,轻轻捅入管口,松紧必须适中,管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去,灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌,也可用纸条斜着从吸管尖端包起,逐步向上卷,头端的纸卷捏扁并拧几下,再将包好的吸管集中灭菌。 
干燥箱灭菌:将包扎好的物品放入干燥烘箱内,注意不要摆放太密,以免妨碍空气流通;不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的温度升至160至170摄氏度并恒温1至2小时,注意勿使温度过高,超过170摄氏度,器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿,温度为120摄氏度持续30分钟即可。温度降至60至70摄氏度时方可打开箱门,取出物品,否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。 用此法灭菌时,绝不能用油、蜡纸包扎物品。 
火焰灭菌:直接用火焰灼烧灭菌,迅速彻底。对于接种环,接种针或其它金属用具,可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。此外,在接种过程中,试管或三角瓶口,也采用通过火焰而达到灭菌的目的。 
来自:青岛日水生物 qdrishui.cn

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该资讯的关键词为:培养基灭菌和注意事项 

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